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【摘要】 目的 分析HBeAg和抗-HBe雙陽(yáng)性的原因。方法 初篩試驗(yàn)用一步法檢測(cè)。復(fù)核試驗(yàn)HBeAg仍用一步法和微粒子酶免分析法，抗-HBe用二步法和微粒子酶免分析法。結(jié)果 63份HBeAg和抗-HBe雙陽(yáng)性標(biāo)本經(jīng)復(fù)核：18份HBeAg陰性，45份抗-HBe陰性。結(jié)論 “e”系統(tǒng)雙陽(yáng)多為操作誤差和一步法造成，必需進(jìn)行復(fù)核。 關(guān)鍵詞 乙型肝炎病毒 酶免檢測(cè) 復(fù)核 乙型肝炎病毒HBeAg陽(yáng)性，表明病毒復(fù)制活躍、傳染性強(qiáng)，與HBsAg同時(shí)陽(yáng)性發(fā)生肝癌的危險(xiǎn)系數(shù)增加60倍，抗-HBe陽(yáng)性說(shuō)明病毒復(fù)制減少，傳染性弱。近年來(lái)，普遍使用ELISA一步法，在工作中遇到HBeAg和抗-HBe雙陽(yáng)性的少見(jiàn)模式，為了分析這一現(xiàn)象，筆者進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)告如下。 1 材料與方法 1.1 標(biāo)本來(lái)源 本院門診和住院患者1910例，其中63例初篩模式為HBsAg、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc4項(xiàng)陽(yáng)性。 1.2 試劑和儀器 （1）ELISA試劑盒、HBeAg和抗-HBe為上海科華生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，批號(hào)分別為：20040316、20040516，酶標(biāo)儀MK-2型、洗板機(jī)均為芬蘭雷索公司產(chǎn)品。HBeAg樣品吸光度值/臨界值（S/N）≥2.1判陽(yáng)性，抗-HBe以抑制率>50%判陽(yáng)性。（2）微粒子酶免分析（MEIA），使用美國(guó)雅培公司試劑和美國(guó)AXSYM全自動(dòng)酶免發(fā)光分析系統(tǒng)。抗-HBe采用競(jìng)爭(zhēng)法，以樣本熒光速率值與臨界熒光速率值之比（S/N）≤1.0判陽(yáng)性。 1.3 方法 （1）初篩：一步法，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，每加5份血清加入酶標(biāo)抗體。分別檢測(cè)HBeAg、抗-HBe.（2）復(fù)核：溶血標(biāo)本重抽血，脂法患者禁脂3天后抽血；血塊收縮不良，分離不完全標(biāo)本，經(jīng)3000r/min10～15min的離心。HBeAg用一步法和微粒子酶免分析。抗-HBe用改進(jìn)二步法和微粒子酶免分析法，改進(jìn)再二步法為先加入50μl血清37℃水浴30min，洗滌3次，加酶標(biāo)抗體37℃水浴30min，再嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。 2 結(jié)果 初篩63份HBeAg和抗-HBe雙陽(yáng)血清。經(jīng)復(fù)核：18份HBeAg陰性，抗-HBe仍陽(yáng)性，45份抗-HBe陰性，HBeAg仍陽(yáng)性。18份HBeAg陰性標(biāo)本為溶血和分離不完全標(biāo)本，初篩與復(fù)檢吸光度（A值）比較明顯下降，差異有非常顯著性（P<0.001），見(jiàn)表1.45份抗-HBe復(fù)核陰性標(biāo)本中，一步法與改進(jìn)2步法吸光度（A值）比較，吸光度值上升，二者差異有非常顯著性（P<0.001），見(jiàn)表2. 表1 HBeAg初篩與復(fù)檢吸光度值比較（略） 表2 3種方法測(cè)定血清抗-HBe水平比較（略） 3 討論 有學(xué)者提出HBeAg和抗-HBe雙陽(yáng)是HBeAg向抗HBe轉(zhuǎn)化的過(guò)渡階段 ［1］ .本次試驗(yàn)與以上理論不完全相符，雙陽(yáng)性結(jié)果是假陽(yáng)性所致，可能的原因?yàn)椋喝苎獦?biāo)本釋放大量過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，產(chǎn)生干擾。血塊收縮不良，分離不徹底，血清中混有過(guò)氧化物酶成分，對(duì)HBeAg產(chǎn)生正干擾 ［2］ .脂濁致抗-HBe干擾主要考慮乳糜微粒引起，它造成血清黏度增大的運(yùn)動(dòng)速度減慢或產(chǎn)生屏蔽效應(yīng)，抗原抗體結(jié)合幾率下降，最終顯色降低，產(chǎn)生假陽(yáng)性。一步法對(duì)抗-HBe易產(chǎn)生前帶現(xiàn)象，若血清中有大量HBeAg，使固相HBeAb-HBeAg-HBeAb-HRP生成減少，顯色下降產(chǎn)生假陽(yáng)性。二步法的第一步洗滌洗掉多余HBeAg，可消除有效的假陽(yáng)性。一步法若加入血清放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，再加酶標(biāo)抗體也會(huì)產(chǎn)生抗-HBe假陽(yáng)性 ［3］ .二步法試驗(yàn)有3份抗-HBe仍為陽(yáng)性，限于條件有限未能研究，可能是抗-HBe和抗-HBc互相干擾所致，或者是AFP、RF、補(bǔ)體、自身抗體、抗大腸桿菌抗體等的干擾［4］ . 綜上所述，HBeAg和抗-HBe雙陽(yáng)多為操作不規(guī)范和一步法影響因素造成。工作中可用一步法復(fù)核HBeAg，改進(jìn)2步法復(fù)核抗-HBe，抗-HBe仍陽(yáng)性采用美國(guó)雅培公司MEIA法復(fù)核可有效消除假陽(yáng)性的產(chǎn)生。 參考文獻(xiàn) 1 朱忠勇。實(shí)用醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)。北京：人民軍醫(yī)出版社，1992，900-901. 2 趙友云，劉光中，馬煜南。酶免疫檢測(cè)HBeAg假陽(yáng)性原因分析。臨床檢驗(yàn)雜志，2000，18：263. 3 騰龍，陳鋼，洪加林。酶免疫競(jìng)爭(zhēng)一步法檢測(cè)乙型肝炎病毒抗-HBe影響因素探討。中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2003，26：111. 4 黃云英，劉瑜。建立乙肝免疫五項(xiàng)無(wú)效試劑。臨床二級(jí)評(píng)價(jià)方案的探討。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2002，17：30-32. |
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