一、概述
霍亂是由霍亂弧菌引起的一種急性腸道傳染病，以發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣為特征，是《國(guó)際衛(wèi)生條例》規(guī)定的國(guó)際檢疫傳染病之一，也是《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定的甲類傳染病之一。《國(guó)內(nèi)交通衛(wèi)生檢疫條例》也將其列為檢疫傳染病。
我國(guó)從1961年第七次霍亂世界大流行開(kāi)始便受到波及，除西藏?zé)o病例報(bào)告外，其余各省（市、區(qū)）均有疫情發(fā)生。1993年開(kāi)始，我國(guó)部分地區(qū)也相繼發(fā)生O139霍亂的局部暴發(fā)與流行。隨后出現(xiàn)了多菌群（型）混合流行的局面。
霍亂弧菌經(jīng)水和食物傳播，流行規(guī)律目前尚不十分明確，引起霍亂流行的自然因素和社會(huì)因素依然存在。沿海水域、河口和內(nèi)陸河流、湖泊等自然水體是霍亂弧菌的自然生境，在自然水體中霍亂弧菌依附浮游生物生存，監(jiān)測(cè)研究發(fā)現(xiàn)霍亂的暴發(fā)流行與氣候和水溫、浮游生物的繁殖有高度的關(guān)聯(lián)。在我國(guó)這些水域同時(shí)也分布著海水、淡水產(chǎn)品（本方案統(tǒng)稱為水產(chǎn)品）養(yǎng)殖基地。霍亂病人糞便常污染人群生活鄰近水體。這些水體中以及水產(chǎn)品攜帶的產(chǎn)毒霍亂弧菌在人群霍亂的發(fā)生和傳播中發(fā)揮作用。為進(jìn)一步加強(qiáng)我國(guó)霍亂監(jiān)測(cè)工作，及時(shí)發(fā)現(xiàn)新病例、識(shí)別暴發(fā)、確定傳染源，同時(shí)進(jìn)一步了解霍亂弧菌在外環(huán)境中的生存變化以及環(huán)境水體和食品污染與流行的關(guān)系，掌握霍亂的流行規(guī)律，為制定防治策略和措施提供科學(xué)依據(jù)，特制訂本方案。
二、監(jiān)測(cè)目的
1、及時(shí)發(fā)現(xiàn)霍亂病例，掌握疫情動(dòng)態(tài)，早期識(shí)別暴發(fā)疫情，分析流行因素；
2、掌握我國(guó)霍亂菌株的型別、分布、毒力、耐藥性變化情況，監(jiān)測(cè)菌型變遷與流行的關(guān)聯(lián)性；
3、了解霍亂弧菌在我國(guó)水體中存在和動(dòng)態(tài)變化情況、以及與沿海和內(nèi)陸霍亂流行的關(guān)系。
三、監(jiān)測(cè)定義
1、腹瀉病例：
指每日排便三次或以上,且具有大便性狀異常的病例。
2、疑似病例
具有下列三項(xiàng)之一者：
（1）凡有典型臨床癥狀，如劇烈腹瀉，水樣便(黃水樣、清水樣、米泔樣或血水樣)，伴有嘔吐，迅速出現(xiàn)脫水或嚴(yán)重脫水，循環(huán)衰竭及肌肉痙攣(特別是腓腸肌)的病例。
（2）霍亂流行期間，與霍亂病人或帶菌者有密切接觸史，并發(fā)生瀉吐癥狀者。
（3）出現(xiàn)無(wú)痛性腹瀉或伴有嘔吐，且糞便或嘔吐物霍亂弧菌快速輔助診斷檢測(cè)試驗(yàn)陽(yáng)性的病例。
3、臨床診斷病例
具有下列三項(xiàng)之一者均可視為臨床診斷病例：
（1）疑似病例的日常生活用品或家居環(huán)境中檢出O1群或/和O139群霍亂弧菌者；
（2）疑似病例的糞便、嘔吐物或肛拭子標(biāo)本霍亂弧菌毒素基因PCR檢測(cè)陽(yáng)性者；
（3）在一起確認(rèn)的霍亂暴發(fā)疫情中，具有直接暴露史且在同一潛伏期內(nèi)出現(xiàn)無(wú)痛性腹瀉或伴嘔吐癥狀者。
4、實(shí)驗(yàn)室確診病例
（1）凡有腹瀉癥狀，糞便、嘔吐物或肛拭子樣品培養(yǎng)O1群或/和O139群霍亂弧菌陽(yáng)性者。
（2）在疫源檢索中，糞便或肛拭子樣品檢出O1群或/和O139群霍亂弧菌前后各6天內(nèi)有腹瀉癥狀者。
5、帶菌者
指無(wú)腹瀉或嘔吐等臨床癥狀，但糞便中檢出O1群或/和O139群霍亂弧菌。
6、臨床分型
（1）輕型：僅有腹瀉癥狀，極少伴嘔吐，大便一天少于10次，大便性狀為軟便、稀便或黃水樣便，個(gè)別患者糞便帶粘液或血，皮膚彈性正常或略差，大多數(shù)患者能照常進(jìn)食及起床活動(dòng)，脈搏、血壓、尿量均正常。
（2）中型：腹瀉次數(shù)一日10～20次，精神表現(xiàn)淡漠，有音啞，皮膚干而缺乏彈性，眼窩下陷，有肌肉痙攣，脈搏細(xì)速，血壓（收縮壓）兒童＜9.33kPa（70mmHg），成人12～9.33kPa（90～70mmHg），尿量每日＜400mL，脫水程度相當(dāng)體重兒童為5％～10％，成人為4％～8％。
（3）重型：腹瀉次數(shù)一日20次以上，極度煩躁甚至昏迷，皮膚彈性消失，眼窩深凹，明顯發(fā)紺，嚴(yán)重肌肉痙攣，脈搏微弱而速，甚或無(wú)脈，血壓（收縮壓）兒童＜6.67kPa（50mmHg），成人＜9.33kPa（70mmHg）或測(cè)不到等循環(huán)衰竭的表現(xiàn)，尿量每日＜50mL或無(wú)尿，脫水程度兒童相當(dāng)于體重10％以上，成人8％以上。
（4）中毒型(干性霍亂)：為一較罕見(jiàn)類型，起病后迅速進(jìn)入休克狀態(tài)，無(wú)瀉吐或?yàn)a吐較輕，無(wú)脫水或僅輕度脫水，但有嚴(yán)重中毒性循環(huán)衰竭。
四、全國(guó)常規(guī)監(jiān)測(cè)
（一）疫情報(bào)告
按照《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》和《突發(fā)公共衛(wèi)生事件與傳染病疫情監(jiān)測(cè)信息報(bào)告管理辦法》，各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、衛(wèi)生檢疫機(jī)構(gòu)執(zhí)行職務(wù)的醫(yī)務(wù)人員發(fā)現(xiàn)疑似、臨床診斷或霍亂確診病例后，城鎮(zhèn)于2小時(shí)內(nèi)，農(nóng)村于6小時(shí)內(nèi)填寫(xiě)報(bào)告卡進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)。不具備網(wǎng)絡(luò)直報(bào)條件的應(yīng)在診斷后以最快的通訊方式報(bào)告疫情，并向相應(yīng)單位送（寄）出“傳染病報(bào)告卡”，縣級(jí)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和具備條件的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院收到傳染病報(bào)告卡后立即進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)。確診病例必須由疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行確認(rèn)和報(bào)告。
各疾病預(yù)防控制中心在接到轄區(qū)內(nèi)霍亂病例報(bào)告后，立即對(duì)病例（和帶菌者）進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查并填寫(xiě)個(gè)案調(diào)查表（見(jiàn)附表1），通過(guò)傳染病疫情網(wǎng)絡(luò)直報(bào)系統(tǒng)“監(jiān)測(cè)信息反饋”上傳至中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。
在5-10月霍亂流行季節(jié)，各省級(jí)疾病預(yù)防控制中心每周三前將上周霍亂疫情監(jiān)測(cè)情況（見(jiàn)附表2）通過(guò)傳染病疫情網(wǎng)絡(luò)直報(bào)系統(tǒng)“監(jiān)測(cè)信息反饋”上傳至中國(guó)疾病預(yù)防控制中心（包括零報(bào)告）。
（二）腹瀉病人檢索
1、腸道門(mén)診的設(shè)立
霍亂多發(fā)地區(qū)的各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)，在霍亂流行季節(jié)須按照衛(wèi)生部有關(guān)規(guī)定設(shè)立規(guī)范的感染科（腸道門(mén)診），包括診療室、觀察室、藥房以及專用廁所，指派專（兼）職醫(yī)、護(hù)、檢人員，配備專用醫(yī)療設(shè)備、搶救藥品、消毒藥械以及采集糞便標(biāo)本的棉簽和放置標(biāo)本的堿性蛋白胨增菌液，制定嚴(yán)格的工作制度及隔離消毒制度。并按要求做好腹瀉病人的就診專冊(cè)登記，逢瀉必登。農(nóng)村基層醫(yī)療單位確因人員與房屋條件不能單獨(dú)設(shè)立時(shí)，也應(yīng)在門(mén)診指定專人負(fù)責(zé)或?qū)Ｗ涝\治。
2、病原學(xué)檢測(cè)
各地必須做到逢疑必檢，即對(duì)每一霍亂疑似病例必須采集糞便或/和嘔吐物等標(biāo)本進(jìn)行病原菌分離培養(yǎng)。在霍亂多發(fā)地區(qū)，以縣為單位每年對(duì)腹瀉病人的病原菌分離檢索率不低于腹瀉病人總數(shù)的10%。
3、工作職責(zé)
樣品采集：各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)醫(yī)務(wù)人員負(fù)責(zé)采集病人、疑似病人的糞便和/或嘔吐物，保存于堿性蛋白胨水中，并及時(shí)送抵相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。
樣品的檢驗(yàn)：具備條件的實(shí)驗(yàn)室按《霍亂防治手冊(cè)》（第五版）開(kāi)展病原菌分離培養(yǎng)及菌株的血清分型。其他病原學(xué)分析檢測(cè)工作由地市級(jí)以上疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)。
菌株的上送：霍亂弧菌菌株管理必須依據(jù)《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》及《中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理辦法》的規(guī)定與要求進(jìn)行保存、運(yùn)送與管理。各實(shí)驗(yàn)室必須設(shè)立霍亂菌株記錄數(shù)據(jù)庫(kù)，填寫(xiě)霍亂菌株登記表（見(jiàn)附表4），記錄菌株的來(lái)源與去向（包括上送及銷毀等）。各醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室分離的霍亂菌株必須立即送當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制中心進(jìn)行復(fù)核鑒定。各縣（區(qū)、市）的首發(fā)病例菌株必須立即上送省疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行復(fù)核，其余菌株在一周內(nèi)逐級(jí)上送至省級(jí)疾病預(yù)防控制中心鑒定與保存。各級(jí)醫(yī)療單位、研究所及省級(jí)以下疾病預(yù)防控制中心未經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)均不得保存。所有菌株在上送的同時(shí)，須按要求（見(jiàn)附表4）提供菌株來(lái)源信息。
（三）暴發(fā)疫情監(jiān)測(cè)
按照《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》，各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、衛(wèi)生檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)執(zhí)行職務(wù)的醫(yī)務(wù)人員發(fā)現(xiàn)霍亂暴發(fā)、流行疫情時(shí)，按照《國(guó)家突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急預(yù)案》規(guī)定級(jí)別的要求進(jìn)行報(bào)告。
在暴發(fā)疫情調(diào)查處理過(guò)程中要加強(qiáng)主動(dòng)搜索，及時(shí)發(fā)現(xiàn)帶菌者，對(duì)所有病例和帶菌者進(jìn)行個(gè)案調(diào)查，并填寫(xiě)個(gè)案調(diào)查表（見(jiàn)附表1），將個(gè)案調(diào)查表錄入數(shù)據(jù)庫(kù)，在上報(bào)疫情總結(jié)報(bào)告時(shí)，一并上報(bào)數(shù)據(jù)庫(kù)。
暴發(fā)疫情處理結(jié)束后，要及時(shí)收集、整理、統(tǒng)計(jì)、分析調(diào)查資料，寫(xiě)出詳細(xì)的報(bào)告，報(bào)告主要內(nèi)容包括：疫情概況、首發(fā)病例或指示病例的描述、流行基本特征、暴發(fā)原因、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果和病原分型、控制措施和效果評(píng)估等。在疫情控制工作結(jié)束后7天內(nèi)完成結(jié)案報(bào)告。
（四）外環(huán)境及食品監(jiān)測(cè)
1、外環(huán)境監(jiān)測(cè)
在霍亂多發(fā)地區(qū)，根據(jù)當(dāng)?shù)鼗魜y疫情形勢(shì)，開(kāi)展環(huán)境水體監(jiān)測(cè)。環(huán)境水體包括淡水和海水養(yǎng)殖場(chǎng)、亞熱帶地區(qū)沿海水域、水產(chǎn)品碼頭、醫(yī)院污水排放口、下水道排放口、肉聯(lián)加工的出廠水、與人群生活關(guān)系密切的河流、池塘、湖泊、水井以及鄉(xiāng)鎮(zhèn)自來(lái)水廠源水等。
2、食品監(jiān)測(cè)
在霍亂多發(fā)地區(qū)，開(kāi)展水產(chǎn)品以及其它食品的監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)的重點(diǎn)包括市售水產(chǎn)品以及生冷、鹵制食品。
在流行季節(jié)，各地按月定期開(kāi)展外環(huán)境和食品的監(jiān)測(cè)工作。各省可根據(jù)本省情況確定監(jiān)測(cè)工作量。外環(huán)境及食品監(jiān)測(cè)的細(xì)菌分離培養(yǎng)由各轄區(qū)疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室完成，分離菌株應(yīng)及時(shí)上送省疾病預(yù)防控制中心；省疾病預(yù)防控制中心應(yīng)對(duì)上送菌株進(jìn)行進(jìn)一步的分析。
環(huán)境和食品監(jiān)測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本填寫(xiě)“霍亂弧菌環(huán)境和食品監(jiān)測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本登記表”（見(jiàn)附表5）。各疾病預(yù)防控制中心每月將監(jiān)測(cè)結(jié)果整理錄入霍亂弧菌環(huán)境和食品監(jiān)測(cè)統(tǒng)計(jì)匯總表（見(jiàn)附表6）按月上報(bào)。
（五）病原學(xué)監(jiān)測(cè)
1、菌株的常規(guī)鑒定
對(duì)獲得的所有霍亂弧菌菌株均必須由各級(jí)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行O1或O139群血清學(xué)分群（型）；以縣（區(qū)、市）為單位的首發(fā)病例的菌株必須進(jìn)行系統(tǒng)的生化鑒定、試管凝集試驗(yàn)、生物學(xué)分型、噬菌體－生物分型、藥敏試驗(yàn)等項(xiàng)目；其余菌株的鑒定項(xiàng)目由各省疾病預(yù)防控制中心按實(shí)際情況確定。
2、霍亂毒素基因檢測(cè)
各省疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)全部菌株的毒素基因（CT）檢測(cè)（按《霍亂防治手冊(cè)》第五版第82頁(yè)的引物序列及PCR擴(kuò)增方法），不具備檢測(cè)條件的省疾病預(yù)防控制中心可送國(guó)家疾病預(yù)防控制中心檢測(cè)。
3、菌株脈沖場(chǎng)凝膠電泳（PFGE）分析
PFGE的檢測(cè)工作由國(guó)家疾病預(yù)防控制中心或有條件的省疾病預(yù)防控制中心按PulseNet China要求的標(biāo)準(zhǔn)方法完成。省疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)選擇代表性菌株開(kāi)展菌株的PFGE分析。
各省疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室對(duì)當(dāng)年菌株的分離和分析情況，按“霍亂菌株實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果匯總表”（見(jiàn)附表7）的項(xiàng)目進(jìn)行匯總，按年逐級(jí)上報(bào)。
4、耐藥性分析
各省由地市級(jí)或省疾病預(yù)防控制中心對(duì)分離菌株耐藥性進(jìn)行分析，每季度選擇一定數(shù)量代表性菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。藥物種類必須至少包括：強(qiáng)力霉素(DOX)、諾氟沙星（NOR）、環(huán)丙沙星（CIP）、復(fù)方新諾明(SMZ)、丁胺卡那霉素(KAN)五種藥物。應(yīng)用Kirby-Bauer紙片法進(jìn)行檢測(cè)，依照《霍亂防治手冊(cè)》（第五版）關(guān)于菌株藥物敏感試驗(yàn)方法操作。每次藥敏試驗(yàn)必須用ATCC 25922大腸桿菌做質(zhì)控。只有當(dāng)質(zhì)控菌株的抑菌圈直徑在允許范圍內(nèi)測(cè)試菌株的結(jié)果才可以報(bào)告。ATCC 25922的結(jié)果必須與測(cè)試菌株同時(shí)記錄和報(bào)告在附表8中。各省藥敏結(jié)果按季匯總，并將附表8、附表9按季度逐級(jí)上報(bào)。
5、菌株的管理
霍亂弧菌菌株管理必須依據(jù)《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》、《中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理辦法》及《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》的規(guī)定與要求進(jìn)行保存、運(yùn)送與管理。各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室分離的霍亂菌株，應(yīng)送交當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制機(jī)構(gòu)進(jìn)行復(fù)核。各疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室必須設(shè)立霍亂菌株登記本，記錄菌株的來(lái)源與去向（包括上送及銷毀等）。所有分離的霍亂弧菌菌株必須送省級(jí)疾病預(yù)防控制中心保存。
對(duì)以下菌株，各省疾控中心應(yīng)把當(dāng)年收集保存的上述菌株送國(guó)家疾控中心霍亂弧菌專業(yè)保藏中心：（1）以縣區(qū)為單位當(dāng)年首發(fā)病例菌株；（2）每個(gè)暴發(fā)點(diǎn)的首例病例菌株、以及暴發(fā)事件中的代表性菌株和疫情相關(guān)的來(lái)自食品和水的菌株；（3）來(lái)自與疫情無(wú)關(guān)的外環(huán)境菌株；（4）首次檢出的新菌型；（5）死亡病例的菌株；（6）國(guó)家疾控中心其他要求上送的菌株。并按霍亂菌株登記表（附表4）的內(nèi)容提供菌株來(lái)源信息。
五、監(jiān)測(cè)點(diǎn)監(jiān)測(cè)
（一）監(jiān)測(cè)點(diǎn)選擇
根據(jù)霍亂流行的自然因素、既往環(huán)境檢測(cè)以及近年疫情流行情況，分別選擇海南、廣東、福建、浙江、上海、天津、廣西、遼寧、四川、北京、江西、山東、江蘇、河南、重慶、新疆和湖南等17個(gè)省份，每省以縣為單位，選擇2個(gè)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，共設(shè)置34個(gè)國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)。要求監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在縣（區(qū)）疾病預(yù)防控制中心具有較好工作基礎(chǔ)，能完成監(jiān)測(cè)任務(wù)。
（二）監(jiān)測(cè)內(nèi)容
1、監(jiān)測(cè)點(diǎn)根據(jù)全國(guó)霍亂監(jiān)測(cè)方案規(guī)定的監(jiān)測(cè)工作開(kāi)展常規(guī)的霍亂監(jiān)測(cè)，包括腸道門(mén)診的設(shè)立、腹瀉病人的登記與檢索、病原學(xué)檢測(cè)、疫情報(bào)告、散發(fā)和暴發(fā)疫情調(diào)查等。在流行季節(jié)，監(jiān)測(cè)點(diǎn)內(nèi)各級(jí)各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)逐月統(tǒng)計(jì)匯總腹瀉病人登記檢索情況，按月上報(bào)至當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制中心。各級(jí)疾病預(yù)防控制中心每月10日前匯總后（見(jiàn)附表3）逐級(jí)上報(bào)至省疾病預(yù)防控制中心。
2、水系監(jiān)測(cè)
（1）海水監(jiān)測(cè)：在霍亂流行季節(jié)（5-10月），海南、廣東、福建、浙江、上海和天津監(jiān)測(cè)點(diǎn)，分別在海岸水域、海水出海口以及海產(chǎn)品養(yǎng)殖區(qū)域各設(shè)立一個(gè)取水點(diǎn)，共三個(gè)取水點(diǎn)，每個(gè)取水點(diǎn)分成相隔數(shù)米的至少3個(gè)取水位置（上、中、下），每個(gè)取水位置采集2份水樣。每月共18份海水樣品，每月采樣一次。
（2）江河水監(jiān)測(cè)
在霍亂流行季節(jié)（5-10月），廣西、遼寧、四川、重慶和江西內(nèi)陸江河水系監(jiān)測(cè)點(diǎn)，沿以往有霍亂疫情發(fā)生地段內(nèi)的江河水域布置三個(gè)取水點(diǎn)。每個(gè)取水點(diǎn)分成相隔數(shù)米的至少3個(gè)取水位置（上、中、下），每個(gè)取水位置采集2份水樣。每月共18份江河水樣品，每月采樣一次。
（3）其他水體監(jiān)測(cè)
各國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，在霍亂多發(fā)地區(qū)容易受到污染、或污染后容易造成人群感染的水體（如湖泊水產(chǎn)品養(yǎng)殖區(qū)、溝塘、水產(chǎn)碼頭、漁港、城市下水道排出口、自來(lái)水廠水源水及衛(wèi)生河等）區(qū)域設(shè)立5個(gè)固定取水點(diǎn)，每點(diǎn)每次采集2份水樣，每月共10份水體樣品，每月采樣一次。
水體標(biāo)本采樣時(shí)，現(xiàn)場(chǎng)收集每份水體樣品的pH、水溫、采樣點(diǎn)環(huán)境溫度三項(xiàng)基礎(chǔ)指標(biāo)。pH測(cè)定用范圍在5.5-10.0的pH試紙，水溫和環(huán)境溫度可以普通酒精溫度計(jì)測(cè)定，并記錄在采樣送檢單（見(jiàn)附表10）。
3、海、水產(chǎn)品監(jiān)測(cè)
在霍亂高發(fā)季節(jié)（5-10月），各國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)對(duì)市售海、水產(chǎn)品、餐館內(nèi)水產(chǎn)品以及養(yǎng)殖場(chǎng)中的水產(chǎn)品進(jìn)行采樣監(jiān)測(cè)，每月至少采集20份全標(biāo)本（標(biāo)本整體或整體的一部分）另采集60份涂抹標(biāo)本（體表涂抹或鰓內(nèi)涂抹等），并記錄在采樣送檢單（見(jiàn)附表11）。
（三）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)
1、菌株分離
樣品采集與檢驗(yàn)方法見(jiàn)“附件2. 水系霍亂弧菌監(jiān)測(cè)點(diǎn)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范”。霍亂弧菌分離培養(yǎng)由監(jiān)測(cè)點(diǎn)疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室完成，分離的霍亂弧菌菌株（包括非O1/非O139群霍亂弧菌）應(yīng)及時(shí)報(bào)告和上送省疾病預(yù)防控制中心。
2、菌株分析
各省疾病預(yù)防控制中心應(yīng)對(duì)上送菌株進(jìn)行鑒定，包括以下指標(biāo)：? 菌株血清群和型別；‚是否為產(chǎn)毒菌株；ƒ O1群El Tor型菌株時(shí)進(jìn)行噬菌體-生物分型鑒定；„ 菌株的PFGE分析，沒(méi)有實(shí)驗(yàn)條件的省份可將菌株送中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所。
3、檢測(cè)結(jié)果報(bào)告
各國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)每月對(duì)分離結(jié)果、包括菌株檢測(cè)結(jié)果整理錄入“監(jiān)測(cè)點(diǎn)水體霍亂弧菌分離記錄表（見(jiàn)附表10）”和“監(jiān)測(cè)點(diǎn)海、水產(chǎn)品霍亂弧菌分離記錄表（見(jiàn)附表11）”，每月10日前將上月檢測(cè)結(jié)果，以電子文件形式逐級(jí)上報(bào)至中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所。
六、監(jiān)測(cè)系統(tǒng)組成和職責(zé)
監(jiān)測(cè)系統(tǒng)由衛(wèi)生部、各級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)、中國(guó)疾病預(yù)防控制中心及各級(jí)疾病預(yù)防控制中心、醫(yī)療機(jī)構(gòu)組成。
（一）衛(wèi)生部和各級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)
衛(wèi)生部領(lǐng)導(dǎo)全國(guó)霍亂監(jiān)測(cè)工作，各級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)負(fù)責(zé)組織開(kāi)展本轄區(qū)內(nèi)霍亂監(jiān)測(cè)工作，并提供所需監(jiān)測(cè)經(jīng)費(fèi)，保證監(jiān)測(cè)工作的順利開(kāi)展。
（二）中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
1、組織全國(guó)監(jiān)測(cè)方案的起草、論證、修改、調(diào)整和完善，為全國(guó)霍亂監(jiān)測(cè)提供技術(shù)指導(dǎo)。
2、組織、確定全國(guó)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的布局，與國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)所在省級(jí)疾病預(yù)防控制中心簽訂協(xié)議，明確具體任務(wù)和目標(biāo)，為國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)提供一定監(jiān)測(cè)經(jīng)費(fèi)補(bǔ)助。
3、組織確定監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)的統(tǒng)一監(jiān)測(cè)和檢測(cè)方法，組織對(duì)全國(guó)省級(jí)疾病預(yù)防控制中心和國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的專業(yè)技術(shù)人員的培訓(xùn)。
4、設(shè)計(jì)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的收集流程、方式，負(fù)責(zé)全國(guó)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的收集、整理，定期對(duì)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的全部數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、反饋。每年對(duì)全國(guó)霍亂監(jiān)測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行年度工作總結(jié)。
5、組織專家定期對(duì)全國(guó)霍亂監(jiān)測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢查、考核。
6、每年組織召開(kāi)全國(guó)霍亂監(jiān)測(cè)年度工作總結(jié)研討會(huì)。
（三）省級(jí)疾病預(yù)防控制中心
1、根據(jù)國(guó)家監(jiān)測(cè)方案，結(jié)合本省實(shí)際情況制定本省監(jiān)測(cè)實(shí)施方案；協(xié)助國(guó)家疾病預(yù)防控制中心確定本省國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，建立和完善本省的監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)。
2、負(fù)責(zé)本省監(jiān)測(cè)專業(yè)技術(shù)人員培訓(xùn)工作。
3、承擔(dān)本省國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的管理、業(yè)務(wù)指導(dǎo)，參與國(guó)家疾病預(yù)防控制中心對(duì)國(guó)家級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的監(jiān)測(cè)工作檢查、考核。
4、與本省國(guó)家級(jí)及省級(jí)監(jiān)測(cè)點(diǎn)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)簽訂協(xié)議，明確具體任務(wù)和目標(biāo)，按其完成情況確定監(jiān)測(cè)經(jīng)費(fèi)補(bǔ)助數(shù)額。
5、完成國(guó)家監(jiān)測(cè)方案中要求的菌株的收集與復(fù)核、病原學(xué)檢測(cè)等監(jiān)測(cè)任務(wù)。
6、對(duì)全省監(jiān)測(cè)資料進(jìn)行收集、匯總和分析，按方案要求的時(shí)限上報(bào)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，并進(jìn)行反饋。
7、對(duì)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的監(jiān)測(cè)工作進(jìn)行質(zhì)量控制。
（四）市級(jí)疾病預(yù)防控制中心
根據(jù)國(guó)家監(jiān)測(cè)方案的要求，協(xié)助省中心完成本地區(qū)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的監(jiān)測(cè)任務(wù)和管理、業(yè)務(wù)指導(dǎo)；參與本地區(qū)監(jiān)測(cè)點(diǎn)的監(jiān)測(cè)工作。
（五）縣級(jí)疾病預(yù)防控制中心
按本監(jiān)測(cè)方案要求，具體實(shí)施監(jiān)測(cè)工作。完成疫情監(jiān)測(cè)與報(bào)告、外環(huán)境監(jiān)測(cè)、個(gè)案調(diào)查、病原學(xué)監(jiān)測(cè)、暴發(fā)疫情調(diào)查與監(jiān)測(cè)等任務(wù)的基礎(chǔ)資料收集工作，按規(guī)定的時(shí)限上報(bào)至省（市）疾病預(yù)防控制中心。負(fù)責(zé)病例標(biāo)本的采集、檢測(cè)、上送。
（六）醫(yī)療機(jī)構(gòu)
醫(yī)療機(jī)構(gòu)處在發(fā)現(xiàn)霍亂病例的最前沿，負(fù)責(zé)完成門(mén)（就）診和住院病例的腹瀉病人的登記和標(biāo)本采集，疫情報(bào)告和腹瀉病人檢索情況統(tǒng)計(jì)報(bào)告，協(xié)助疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)開(kāi)展病例個(gè)案調(diào)查，配合疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)完成本方案所要求的其它監(jiān)測(cè)工作等。
七、數(shù)據(jù)收集、分析、反饋
（一）數(shù)據(jù)收集
1.1霍亂個(gè)案調(diào)查表
1.2霍亂疫情周報(bào)表
2. 腸道門(mén)診病人登記表
3．腹瀉病人登記檢索月報(bào)表
4.霍亂菌株登記表
5．菌株實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果匯總表
6．霍亂弧菌環(huán)境和食品監(jiān)測(cè)統(tǒng)計(jì)月報(bào)匯總表
7．霍亂弧菌環(huán)境和食品監(jiān)測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本登記表
8．霍亂菌株藥敏結(jié)果記錄表
9.霍亂菌株藥敏結(jié)果匯總報(bào)表
10．暴發(fā)疫情調(diào)查處理報(bào)告
（二）數(shù)據(jù)收集流程
監(jiān)測(cè)點(diǎn)實(shí)施監(jiān)測(cè)內(nèi)容，各種數(shù)據(jù)收集、分析以及各種標(biāo)本的采集
縣疾病預(yù)防控制中心→→→市疾病預(yù)防控制中心
↓↓
省級(jí)疾病預(yù)防控制中心
↓↓
中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
（三）統(tǒng)計(jì)分析
1、腹瀉病人檢索率
2、每周、月、年發(fā)病數(shù)（例）、死亡數(shù)（例）、帶菌數(shù)、發(fā)病率（/10萬(wàn)）、病死率（％）和死亡率（/10萬(wàn)）。
3、病人年齡、性別、職業(yè)、時(shí)間分布。
4、病例臨床分型：輕、中、重型
5、水、食品監(jiān)測(cè)樣品檢出率
6、分離菌株的型別、噬菌體-生物分型、菌株耐藥性、毒素基因檢測(cè)、脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型等
7、暴發(fā)疫情的流行特征、分析
（四）數(shù)據(jù)的報(bào)告和反饋
監(jiān)測(cè)工作月報(bào)于每月10日前、季報(bào)在下季度首月10日前，年報(bào)于下年度2月10日前上報(bào)至中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所。中國(guó)疾病預(yù)防控制中心每季度以簡(jiǎn)報(bào)形式向各地反饋監(jiān)測(cè)結(jié)果，并負(fù)責(zé)完成年度全國(guó)監(jiān)測(cè)總結(jié)報(bào)告。
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八、監(jiān)測(cè)系統(tǒng)質(zhì)量控制
（一）方案的起草和論證
衛(wèi)生部組織全國(guó)相關(guān)專家起草監(jiān)測(cè)方案，并廣泛論證。
（二）培訓(xùn)
在監(jiān)測(cè)工作開(kāi)始前，由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心組織統(tǒng)一培訓(xùn)。
（三）監(jiān)測(cè)工作的質(zhì)量評(píng)價(jià)
質(zhì)量控制用于分析和監(jiān)督各級(jí)單位監(jiān)測(cè)工作的質(zhì)量，包括工作的及時(shí)性、準(zhǔn)確性和覆蓋范圍。可以通過(guò)以下指標(biāo)的分析進(jìn)行質(zhì)量控制：
人員培訓(xùn)情況；
病例診斷及時(shí)性；
疑似診斷或確診后流行病學(xué)調(diào)查及時(shí)性；
漏報(bào)率；
腹瀉病例檢索率和分離率；
信息報(bào)告及時(shí)性；
實(shí)驗(yàn)室分離菌株的時(shí)間和檢測(cè)菌株的比例；
菌株復(fù)核率；
技術(shù)資料檔案管理、原始記錄、總結(jié)等完整性。
九、附件
附表1 年霍亂個(gè)案調(diào)查表
附表2 年 月第 周霍亂疫情監(jiān)測(cè)報(bào)表
附表3 年 月腹瀉病人登記檢索報(bào)表
附表4 年霍亂菌株登記表
附表5 年 月霍亂弧菌環(huán)境和食品監(jiān)測(cè)陽(yáng)性標(biāo)本登記表
附表6 年 月霍亂弧菌環(huán)境和食品監(jiān)測(cè)統(tǒng)計(jì)報(bào)匯總表
附表7 年霍亂菌株實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果匯總表
附表8 年 季度霍亂菌株藥敏結(jié)果記錄表
附表9 年 季度霍亂菌株藥敏結(jié)果匯總報(bào)表
附表10 年 月監(jiān)測(cè)點(diǎn)水體監(jiān)測(cè)霍亂弧菌分離記錄表
附表11 年 月監(jiān)測(cè)點(diǎn)海、水產(chǎn)品霍亂弧菌分離記錄表
附件1 霍亂暴發(fā)疫情調(diào)查
附件2 水系霍亂弧菌監(jiān)測(cè)點(diǎn)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范
附件1 霍亂暴發(fā)疫情調(diào)查
一、疫情發(fā)現(xiàn)和報(bào)告
各級(jí)疾病預(yù)防控制中心應(yīng)密切注意本轄區(qū)的腹瀉疫情動(dòng)態(tài)，在霍亂高發(fā)季節(jié)，尤其對(duì)具有霍亂類似癥狀并且短時(shí)間（五天）內(nèi)在同一地區(qū)出現(xiàn)多個(gè)癥狀相似的病例報(bào)告，需要通過(guò)病例及其報(bào)告的分析，考慮和避免霍亂的漏診或誤診。
各級(jí)疾病預(yù)防控制中心接到霍亂暴發(fā)或疑似暴發(fā)疫情后，需詳細(xì)記錄報(bào)告者和報(bào)告單位的聯(lián)系方式、疫情發(fā)生地點(diǎn)和時(shí)間以及病例數(shù)等概況、病例特征、臨床和實(shí)驗(yàn)室診斷、詢問(wèn)對(duì)可能污染源的調(diào)查情況，并告知報(bào)告單位保留可疑食品、水及病人吐瀉物以便進(jìn)一步檢查。立即向上級(jí)報(bào)告，迅速建立工作隊(duì)伍。可實(shí)施網(wǎng)絡(luò)直報(bào)的專業(yè)衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的報(bào)告者對(duì)確證病例需立即進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)直報(bào)。
二、現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查
霍亂暴發(fā)現(xiàn)場(chǎng)的處理要本著“時(shí)間早、范圍小、措施嚴(yán)、落到實(shí)處”的原則，調(diào)查與處理同步進(jìn)行。現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查工作主要包括：
1．核實(shí)診斷。到達(dá)現(xiàn)場(chǎng)后首先通過(guò)訪視病人、醫(yī)生和能提供病人患病信息的人，檢查實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，對(duì)臨床標(biāo)本或獲得的分離菌株應(yīng)送平行的或上一級(jí)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室重復(fù)檢測(cè)，以進(jìn)行診斷的核實(shí)。
2．散發(fā)或暴發(fā)流行的基本概況描述。統(tǒng)計(jì)病例在時(shí)間、地點(diǎn)和人群中的分布，劃定疫點(diǎn)、疫區(qū)，分析二、三代病例，從流行病學(xué)上分析傳播鏈。
3．個(gè)案調(diào)查。立即開(kāi)展個(gè)案調(diào)查，按照“附表1. 霍亂個(gè)案調(diào)查表”以及“附表2.霍亂個(gè)案基本信息表”進(jìn)行調(diào)查。附表2為在接收新病例后立即開(kāi)展的調(diào)查并可于病人發(fā)病1-2天內(nèi)獲得的結(jié)果，該表格需立即上報(bào)；附表1為病人已明確轉(zhuǎn)歸、對(duì)疫點(diǎn)處理完成后填寫(xiě)的內(nèi)容，可在病例救治和疫點(diǎn)處理完成后填寫(xiě)并上報(bào)，該表格等同于《霍亂防治手冊(cè)》（第五版）中的個(gè)案調(diào)查表。個(gè)案調(diào)查應(yīng)及時(shí)匯總分析。
4．散發(fā)、暴發(fā)流行因素的流行病學(xué)調(diào)查和分析。應(yīng)通過(guò)個(gè)案調(diào)查信息和病例的三間（時(shí)間、地點(diǎn)、人群）描述，推斷首發(fā)病例、傳播鏈，提出感染來(lái)源的假設(shè)，設(shè)計(jì)病例對(duì)照研究等方法進(jìn)行發(fā)生因素的分析，以追溯感染來(lái)源，調(diào)查受累人群。應(yīng)對(duì)病人的行為因素、自然環(huán)境因素等廣泛收集資料，收集疫點(diǎn)（疫區(qū)）的基本資料，包括氣象、地理、水系、人口狀況、生活習(xí)慣、環(huán)境與飲食衛(wèi)生、醫(yī)療服務(wù)設(shè)施和能力等，在個(gè)案調(diào)查表中應(yīng)盡可能詳細(xì)調(diào)查感染者發(fā)病前五天內(nèi)的飲食行為。
5．調(diào)查和確定密切接觸者。目的是發(fā)現(xiàn)新病例、疑似病例以及帶菌者，是主動(dòng)檢測(cè)和監(jiān)測(cè)，防止誤診和漏診，從流行病學(xué)上確定可能的播散范圍并按《霍亂防治手冊(cè)》（第五版）中的有關(guān)規(guī)定采取控制措施。對(duì)帶菌者的個(gè)案調(diào)查可使用附表1填寫(xiě)相關(guān)項(xiàng)目。
6．樣品采集、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)應(yīng)與流行病學(xué)調(diào)查密切結(jié)合，從最早懷疑或診斷霍亂病例開(kāi)始即需要收集病人臨床標(biāo)本，包括糞便、嘔吐物和血清。前兩者用于霍亂病原分離，后者收集臨床急性期和恢復(fù)期雙份血清、在始終沒(méi)有獲得病原時(shí)通過(guò)殺弧菌抗體的升高可輔助診斷。在工作能力可達(dá)到的范圍內(nèi)，要對(duì)每個(gè)病例收集標(biāo)本分離霍亂弧菌。對(duì)病人接觸的可疑食品及可疑水體，廣泛和規(guī)范地采集標(biāo)本進(jìn)行病原分離。因聚餐引起的暴發(fā)，除采集可疑食品標(biāo)本外，對(duì)食品清洗水的來(lái)源也需采集標(biāo)本做病原分離。獲得的病原體按本方案中的相關(guān)規(guī)定作病原特征檢測(cè)，匯總報(bào)告。外環(huán)境和食品中分離的病原，提供給相關(guān)實(shí)驗(yàn)室作進(jìn)一步分析，確定是否相似，以從病原學(xué)上獲得感染來(lái)源證據(jù)。在流行病學(xué)調(diào)查的始終、安排相應(yīng)的標(biāo)本采集和檢測(cè)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)，與流行病學(xué)監(jiān)測(cè)相結(jié)合分析感染來(lái)源和暴發(fā)流行的擴(kuò)散。
7．疫點(diǎn)（疫區(qū)）處理。按照《霍亂防治手冊(cè)》（第五版）以及其他有關(guān)霍亂防治文件的規(guī)定進(jìn)行疫情控制。
8．補(bǔ)充調(diào)查。隨調(diào)查的深入、假設(shè)的提出和驗(yàn)證的需求、以及控制和預(yù)防工作的展開(kāi)，根據(jù)需要及時(shí)開(kāi)展補(bǔ)充調(diào)查，包括流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。
9．總結(jié)。對(duì)散發(fā)、暴發(fā)流行的處理，在控制工作完成后進(jìn)行系統(tǒng)全面的工作總結(jié)，并將總結(jié)報(bào)告逐級(jí)報(bào)上一級(jí)疾病控制中心，直至國(guó)家疾病控制中心。總結(jié)報(bào)告中需包括依據(jù)具體數(shù)據(jù)（如采取控制措施前后的二代發(fā)病率、標(biāo)本的病原分離率等，見(jiàn)《霍亂防治手冊(cè)》第五版中第二章第二節(jié)“三、防治措施的效果評(píng)價(jià)”）對(duì)控制工作的評(píng)價(jià)和下一步工作建議。
附件2 水系霍亂弧菌監(jiān)測(cè)點(diǎn)監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范
一、采樣與送檢技術(shù)規(guī)范
1．水體：水體的采樣一般要求用滅菌的500ml水樣瓶采集相對(duì)靜止的表層水（30cm以內(nèi)）500ml，加蓋密封后在室溫（20-25℃）下送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。取水點(diǎn)的選擇應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查等資料確定，同時(shí)，采樣時(shí)應(yīng)選擇在水流平穩(wěn)或靜止處吸取。非疫情狀態(tài)下的監(jiān)測(cè)采樣時(shí)間一般在清晨時(shí)，此時(shí)水體未受人群活動(dòng)等因素影響。每個(gè)采樣點(diǎn)中采樣位置應(yīng)相距數(shù)米、采集不少于2瓶做為平行檢測(cè)。
采樣時(shí)立即測(cè)定采集樣品的溫度、pH，并記錄當(dāng)天的最高溫度和最低溫度，數(shù)據(jù)始終隨每份樣品的檢測(cè)報(bào)告逐級(jí)上報(bào)。
2．水產(chǎn)品：水生動(dòng)物的采樣通常選取活的或新鮮的水生動(dòng)物為采集對(duì)象，有時(shí)也應(yīng)考慮冰凍的水生動(dòng)物，以無(wú)菌操作采集合適的部位，如鰓部和/或腸內(nèi)容物等，置采樣瓶（管）或食品采樣袋密封，在常溫下送檢。有條件的采樣點(diǎn)可將水生動(dòng)物整體采回實(shí)驗(yàn)室再進(jìn)行相關(guān)處置。同時(shí)，要求以無(wú)菌棉簽涂抹五只（條）以上的某類水生動(dòng)物體表、鰓及/或肛門(mén)，置堿性蛋白胨水送檢，每管堿性蛋白胨水作一份樣品看待。
3．樣品的送檢：統(tǒng)一要求在樣品采集后，按生物安全規(guī)范，在室溫條件下3小時(shí)內(nèi)送抵實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展霍亂弧菌的分離培養(yǎng)。在北方地區(qū)冬季采樣時(shí)，應(yīng)注意樣品的保溫，防止結(jié)冰。
二、水體和水產(chǎn)品樣本霍亂弧菌分離培養(yǎng)技術(shù)規(guī)范
（一）培養(yǎng)基要求：以堿性蛋白胨水（pH 8.6）作為增菌液；強(qiáng)選擇性分離培養(yǎng)基使用慶大霉素培養(yǎng)基或TCBS培養(yǎng)基；弱選擇性培養(yǎng)基統(tǒng)一使用堿性瓊脂。應(yīng)注意不同廠商以及不同批號(hào)培養(yǎng)基的質(zhì)量，每批培養(yǎng)基在使用前必須進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，無(wú)條件開(kāi)展質(zhì)量檢測(cè)的監(jiān)測(cè)點(diǎn)應(yīng)由省疾病預(yù)防控制中心協(xié)助解決。
（二）水體樣本的增菌：增菌培養(yǎng)方法規(guī)定采用以下兩種之一。
1．十倍濃縮堿胨水增菌培養(yǎng)法：詳見(jiàn)《霍亂防治手冊(cè)》（第五版）第75頁(yè)。
2．濾膜富集增菌培養(yǎng)法：以0.45微米濾膜，使用Millipore真空過(guò)濾系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌富集，富集后的濾膜置含有終濃度為1/20萬(wàn)亞碲酸鉀的10ml堿性蛋白胨水三角瓶?jī)?nèi)增菌。
3．水產(chǎn)品樣本增菌：使用無(wú)菌棉簽涂抹的樣品，直接接種到堿性蛋白胨水作為增菌液處理。整體或局部采回的樣品，在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)先在無(wú)菌操作的條件下，將其解剖，取鰓部和腸內(nèi)容物剪碎后，置100ml三角瓶?jī)?nèi)，加入5-10倍體積的堿性蛋白胨水增菌；但小貝殼類動(dòng)物，則用錘子將外殼擊碎，整體放入三角瓶中增菌；甲殼類動(dòng)物除含肉質(zhì)部分外，其余部分（包括鰓、腸、足、表層外殼等）整體放入三角瓶進(jìn)行增菌處理。
4．環(huán)境樣品的霍亂弧菌分離培養(yǎng)程序：樣品在37℃經(jīng)8-12h增菌后，每份樣品分別接種一個(gè)9cm直徑的慶大霉素瓊脂或TCBS瓊脂平板和一個(gè)堿性瓊脂平板進(jìn)行劃線分離培養(yǎng)，同時(shí)，以無(wú)菌吸管吸取0.2-0.5ml增菌液接種到新的堿性蛋白胨水中，進(jìn)行二次增菌培養(yǎng)后，再如上述步驟進(jìn)行劃線分離培養(yǎng)。特別強(qiáng)調(diào)所有環(huán)境樣品的增菌分離培養(yǎng)步驟必須包括上述二次增菌和強(qiáng)、弱雙平板分離。
5．疑似菌落鑒定基本要求：分別從慶大霉素瓊脂或TCBS瓊脂、堿性瓊脂平板上各挑取5個(gè)以上的（少于5個(gè)的全部挑取）疑似菌落接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面置37℃18-24h純培養(yǎng)（即每份樣品至少?gòu)?個(gè)分離平板上獲得約20株可疑菌落菌株），取斜面純培養(yǎng)物進(jìn)行O1群及O139群霍亂診斷血清玻片凝集試驗(yàn)，血清凝集陽(yáng)性的菌株繼續(xù)相關(guān)的系統(tǒng)鑒定并報(bào)告結(jié)果。必須注意同一樣品中O1、O139群霍亂弧菌可能同時(shí)存在，有必要對(duì)所有選出的菌株都進(jìn)行凝集試驗(yàn)，以免遺漏。從環(huán)境中檢出的O1或O139群霍亂弧菌，要求即時(shí)上送省疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行噬菌體-生物分型，具備條件的進(jìn)行毒素基因的PCR檢測(cè)、確定是否采取相關(guān)措施。
在有條件的單位，對(duì)血清凝集試驗(yàn)陰性的菌株，可進(jìn)行氧化酶和粘絲試驗(yàn)初篩非O1/非O139群霍亂弧菌，并保留菌株按監(jiān)測(cè)方案的要求逐級(jí)上送至省疾病預(yù)防控制中心。
下載全部附表
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