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細胞傳代的參考步驟

作者：admin 來源：丁香園論壇發(fā)布時間： 2014-08-27 23:08　瀏覽次數：

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本人之前總結的，Hela細胞傳代步驟。零經驗的新手們看看參考參考吧，老手們也多提些意見，以利改進。

Hela細胞確實比較好養(yǎng)，出點小差錯也不會死，確實是新手開始練習培養(yǎng)細胞的比較好的選擇。

廢話不多講，進入正題：

1、75%乙醇擦手，取離心管一個，打開超凈臺（照明、風機），把離心管置于架子上。然后用75%乙醇擦一下臺面，點燃酒精燈。

2、取尖吸管、吸量管各一支，套好吸球，放置在專用的架上。

3、從冰箱中取出胰酶、PBS（或者versene）、培養(yǎng)基。可以把胰酶和PBS（versene）的瓶蓋打開或者擰松。

4、取待傳代的細胞

5、用尖吸管棄去舊的培養(yǎng)基，吸量管加入PBS（versene），然后將PBS（versene）瓶收起來。

6、用尖吸管洗一下細胞，然后將PBS（versene）棄掉；用吸量管吸取適量胰酶加入。棄掉吸量管。

7、將細胞放入37度孵箱。將胰酶和PBS（versene）瓶放入4度。

8、取一支吸量管，吸取適量培養(yǎng)基加入離心管。

9、取細胞，鏡下觀察消化情況。消化程度合適之后，用尖吸管棄去胰酶，取離心管中的培養(yǎng)基加入細胞，吹打，至所有細胞從培養(yǎng)皿底部脫落下來，然后吸取至離心管中，800 rpm離心5分鐘。

10、吸量管吸取適量培養(yǎng)基加入新的培養(yǎng)皿中。將培養(yǎng)基收至4度保存。棄掉吸量管。

11、細胞離心畢，尖吸管棄去上清，吸取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基適量，加入離心管，將細胞重懸、吹勻。

12、細胞懸液加入新的培養(yǎng)皿中。鏡下觀察，搖勻，放入37度孵育。收超凈臺。

以上是本人傳代Hela細胞的步驟。總計使用1根尖吸管、2根吸量管，還是比較節(jié)省的。其中一些細節(jié)，例如液體加入的具體量、細胞傳代的比例，大家按情況，沒有定值。

另外，versene對細胞有毒性，且不能被血清中和，必須離心去除。如果用PBS洗細胞，可不用離心。

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