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生物知識

FastDNA SPIN Kit for Soil (土壤DNA提取試劑盒)使用說明

作者:admin 來源:本站 發布時間: 2014-10-13 09:57  瀏覽次數:
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FastDNA SPIN Kit for Soil使用方法
 
1. 加入500 mg土壤到Lysing Matrix E管中。加入978 μl Sodium Phosphate Buffer(磷酸鈉緩沖液)和122 μl MT BufferMT緩沖液)。  
注意1:因為FastPrep®儀器的劇烈運動,在Lysing Matrix E管內會形成巨大的壓力,樣品和基質的總體積不能超過管體積的7/8;留一些空間也會提高混勻效果。
  
裂解:加入978 μl Sodium Phosphate Buffer(磷酸鈉緩沖液)和122 μl MT BufferMT緩沖液)。
  
2. FastPrep®中處理上述離心管,速度5.530秒。  
 
3. Lysing Matrix E管離心14000g×10分鐘。
注意2:對于大樣品可延長振蕩時間到15分鐘。  
 
4. 將上清液轉移到一個新的2ml離心管(自備)中,加入250μl PPS,并用手搖10次進行混合。
 
5. 離心14000g×5分鐘,至形成球狀沉淀物,將上清液轉移到一個新的5ml離心管(自備),并加入1ml Binding Matrix Suspension(在用之前重懸Binding Matrix Suspension)。
 
6. 放到旋轉體或用手顛倒2分鐘,使DNA附著到基質上,把離心管放到架子上靜置3鐘。
  
7. 小心去除500μl上清,避免擾動沉淀的Binding Matrix,重懸剩余的上清;轉移大約600μl的混合液到一個SPINTM Filter中,離心14000g×1分鐘;將SPINTM Filter下面catch tube中的液體倒掉;重復上述過程直到剩余混合液全部轉移離心完(1.5mL污泥樣品一般要轉移三次)。  
 
8. 加入500μl SEWS-MSPINTM Filter中,離心14000g×1分鐘;將SPINTM Filter下面catch tube中的液體輕輕地倒掉,再離心14000g×2分鐘,去除基質中的SEWS-M  
 
9. SPINTM Filter放到一個新的Catch Tube中,在室溫下風干SPINTM Filter 5分鐘。  
 
10. 加入50μl DESDNase/Pyrogen Free Water),用移液槍槍頭在濾膜上輕輕攪動,使濾膜上的沉淀物重懸,從而使DNA有效洗提;離心14000g×1分鐘,使DNA轉移到Catch Tube中。  
 
需要準備:
 
滅菌:2ml離心管,5ml離心管,200μl 1000μl槍頭,純水
 

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