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生物知識

Fast DNA? SPIN Kit for Soil 土壤DNA快速提取試劑盒提取步驟

作者:admin 來源:本站 發布時間: 2014-10-13 17:32  瀏覽次數:
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 Fast DNA® SPIN Kit for Soil土壤DNA快速提取試劑盒提取步驟 

 (沒有FastPrep®儀器的情況下) 

 (1)稱取0.3 g~0.4 g樣品加入Lysing Matrix E Tube 中。(注意:需保證加完樣品及所需溶液后,管中應留出不少于200 μL 空間)  

(2)加入978 μL SPB,加入122 μL MT Buffer。  

(3)蓋緊Lysing Matrix E Tube的蓋子,將離心管置于渦旋混合儀上,對管內物質進行震蕩破碎均質化,時間設定為40 s~50 s。(注意:時間不可過長,有可能打斷基因組DNA片段降低提取質量)從各個角度都可以震蕩一下,不要光是底部。  

(4)8000 r/min轉速下離心15 min,有利于去除體積較大或具有復雜細胞壁結構的樣品碎屑。  

(5)將上清液用大口槍頭吸出轉入1.5 mL的微離心管中,加入250 μL PPS,手持離心管晃動10次以混勻。  

(6)8000 r/min下離心5 min,用大口槍頭將上清液轉移至5 mL離心管中。  

(7)搖勻Binding Matrix后,吸取1.0 mL加入上一步離心管中。  

(8)將離心管上下顛倒2 min后,靜置3 min,使DNA附著于Bingding Matrix上,并等待二氧化硅基質沉淀。(這一步根據沉淀情況時間可以適當延長)

 (9)小心移除600 μL上清液,避免吸出沉淀物。  

(10)將剩余的上清液與沉淀物重新混勻,吸取約600 μL混合液移入SPIN Filter中,8000 r/min下離心1 min。  

(11)倒掉收集管中的液體,重復上一步操作直至5 mL離心管中的液體吸盡。 

(12)加入已制備好的SEWS-M溶液500 μL,用小槍頭小心混勻后,8000 r/min下離心1 min后,棄去收集管中的液體。  

(13)為更好的去除雜離子,重復第12步,更換為1.5 mL離心管。

 (14)在8000 r/min下離心2 min,去除殘留的SEWS-M溶液,然后更換為干凈的1.5 mL離心管。(若發現殘余溶液較多,可重復此步驟) 

(15)在室溫下,將SPIN Filter風干5 min。(時間可以更久一些)

 (16)往SPIN Filter加入80 μL DES溶液,用小槍頭小心使之與Binding Matrix 混勻,65℃水浴15 min(有利于DNA的溶出)。8000 r/min下離心2 min,可得到約50 μLDNA溶液。再加入80 μL DES溶液重復第16步操作,一共可得到約100 μLDNA溶液。  

17)棄去SPIN Filter,將提取好的DNA存于-20℃冰箱保存。

 

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