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生物知識

細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

作者:admin 來源:本站 發(fā)布時(shí)間: 2014-12-31 12:08  瀏覽次數(shù):
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1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,無菌室及無菌操作臺(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌,以70 %ethanol 擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后,才開始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺,以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后,再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。

2. 無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置,其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以 70 % ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無菌區(qū)域,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。

3. 小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45° 角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對于來自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當(dāng)?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少 Class II)。操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭之傷害等。

5. 定期檢測下列項(xiàng)目:
      5.1. CO2 鋼瓶之CO2壓力
      5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換)。
      5.3. 無菌操作臺內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),3000 小時(shí)/HEPA)。

6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),定期更換水槽的水

請問工作濃度的胰酶是不是應(yīng)保存在-20度?如果放在4度冰箱可以保存多久呢?是不是幾個(gè)小時(shí)就會(huì)失去活性?

平時(shí)放在-20度,分裝在50毫升螺口管,用時(shí)拿一管放4度用。

1. 認(rèn)真按照操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn),一般不大會(huì)導(dǎo)致污染,很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實(shí)驗(yàn)失敗,

2. 粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),一般在4度盡量不要超過1個(gè)月,如在-20度存放時(shí)間可長一些,但最好也不要超過3-4個(gè)月,可能對于永生化細(xì)胞株來說要求不是太高,但我在過去的4年里一直是作原代 細(xì)胞培養(yǎng) 的,細(xì)胞嬌弱,經(jīng)驗(yàn)表明放置時(shí)間不宜過長。

3. 關(guān)于實(shí)驗(yàn)用品的清洗與消毒,我的經(jīng)驗(yàn)是:用過的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上,然后加少許清洗劑,以超聲波洗滌30min左右,(如無超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗干凈),撈出晾干,再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過夜)后,自來水清洗10-15遍,雙蒸水清洗3-4遍,晾干,高壓消毒后即可使用。

許多塑料制品也可以高壓消毒,例如培養(yǎng)瓶蓋,膠塞,吸頭等。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了,當(dāng)然如果 money有限,如進(jìn)口的培養(yǎng)板、皿等,也可以重復(fù)使用1-2次,我當(dāng)時(shí)使用方法是將其完全清潔后,使用前在紫外燈下敞開照射1-1.5h即可,我做過多次,沒有出現(xiàn)問題。塑料培養(yǎng)瓶由于清洗消毒不便,最好不要重復(fù)使用,如一定要重復(fù)用,可用環(huán)氧乙烷等消毒,(消毒后一定要放置半年以上方可使用)

在光鏡下,上皮細(xì)胞通常呈“鋪路石”樣排布,細(xì)胞之間有拉絲現(xiàn)象(即距離較遠(yuǎn)的細(xì)胞可以通過細(xì)長的觸手相連),細(xì)胞有成片生長的特性。而間質(zhì)細(xì)胞通常呈梭形,沒有有成片生長的特性,細(xì)胞之間的聯(lián)系不緊密。但是細(xì)胞的形態(tài)特征會(huì)因?yàn)樯L條件的改變而改變,如HeLa細(xì)胞是上皮細(xì)胞,但是在酸性培養(yǎng)條件下會(huì)變?yōu)樗笮巍?/p>

 

 

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