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生物知識

血清滅活嗎?不用浪費時間了!

作者:admin 來源:本站 發(fā)布時間: 2019-03-23 14:28  瀏覽次數(shù):
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這個”血清熱滅活”的場景很熟悉嗎?

你有可能在浪費時間!

 

 

血清熱滅活非必要
  血清熱滅活的步驟在1970年代就已建立,至今成為很多實驗室的常規(guī)血清前處理步驟;但許多先前認(rèn)為必須熱滅活的原因,卻早已經(jīng)不再成立:

 

 

  • 去除支原體污染?
    早期血清加工使用的450nm濾膜,早已被100nm濾膜取代;且隨著加工技術(shù)的創(chuàng)新及嚴(yán)格的監(jiān)控,血清產(chǎn)品早已沒有支原體污染的疑慮。

  • 去除補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì)? 
    胎牛血清中含有的補(bǔ)體僅為成年牛血清5-50%,而C3 (補(bǔ)體中引起免疫反應(yīng)的主成分)在胎牛血清中則幾乎不能檢出,直接使用血清對大多數(shù)的細(xì)胞株沒有負(fù)面影響。


                                                                 
     血清熱滅活對細(xì)胞生長無明顯幫助  

  細(xì)胞生物學(xué)家比較了正常熱滅活胎牛血清對各種細(xì)胞株的生長能力影響,發(fā)現(xiàn)11株細(xì)胞中,熱滅活對6 株細(xì)胞有負(fù)面影響(紅)、3株無影響(綠)、2株有微弱正面改善(黃)(下圖1)。


 

 

                                                                ▲圖1:使用未滅活或滅活血清的細(xì)胞生長狀況。

 

  所以,在正常操作下,熱滅活通常對“細(xì)胞生長”沒有明顯的促進(jìn)作用,反而會破壞血清內(nèi)生長因子,維生素,氨基酸等珍貴物質(zhì),降低細(xì)胞增殖速度。

                                                                  血清熱滅活的缺點

 

  萬一小艾設(shè)錯水浴溫度或忘記按計時器,都會導(dǎo)致過高的加熱溫度(下圖2)或過長的加熱時間(下圖3),進(jìn)而大大降低血清的功能,影響細(xì)胞生長的表現(xiàn)。

                                           

                                                      ▲圖2:過高的加熱溫度降低大多細(xì)胞株生長速度(僅一株未受明顯影響)

                                          

                                                     ▲圖3:過長的加熱時間降低大多細(xì)胞株生長速度(僅一株未受明顯影響)

   且滅活加熱過程會增加血清的沉淀狀況,而沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染,進(jìn)而耗費大量時間及精力驗證是否污染,導(dǎo)致實驗一再拖延。

                                            我的細(xì)胞一定要用滅活血清怎么辦?

 

  在滅活過程中,除了需要嚴(yán)格監(jiān)測加熱溫度認(rèn)真計算時間,還有幾個小技巧可以注意噢!

  

 

  • 滅活時,水浴槽水面與血清液面等高。
      
      使用水浴槽時,大多數(shù)人為避免血清瓶浮起來,會減少水浴槽內(nèi)的水量,讓水面降低;數(shù)據(jù)顯示,降低水面也會使瓶內(nèi)加熱不均、拉長加熱時間(下圖4),增加血清破壞程度;所以還是建議將水浴槽內(nèi)水量增加,讓水面與血清液面等高,讓血清最大面積的接觸水流,增加滅活效率!

    ▲圖4:300ml刻度水位需要60分鐘加溫;500ml刻度水位僅需40分鐘加溫

      至于血清瓶漂浮的問題,套上燒瓶用鉛環(huán)(下圖5)就解決啦!


    ▲圖5:燒瓶用鉛環(huán)。

    • 滅活后,使用冷水浴降溫!  

      滅活后如果直接放在室溫或4度冰箱冷卻,僅靠空氣傳導(dǎo)散熱,冷卻效果差(下圖6),使得實際加熱時間拉長,對血清的影響較大;反之,流動的冷水浴散熱速度較快,冷卻效果佳,縮短降溫時間的同時,也減少對血清的破壞。


  • ▲圖6:比較冷水浴及4℃冰箱降溫速度。

 

養(yǎng)細(xì)胞的各位
是不是該重新檢視

自己的實驗步驟了呢?

 

 

本文重點

 

  1. 現(xiàn)代血清加工技術(shù)進(jìn)步,熱滅活已成為非必要步驟。

  2. 熱滅活對細(xì)胞生長沒有明顯促進(jìn)作用,反而會破壞血清、增加沉淀狀況。

  3. 除非文獻(xiàn)指出該細(xì)胞必須使用滅活血清,一般細(xì)胞培養(yǎng)可省略血清熱滅活步驟。

  4. 如果必須使用滅活血清,加熱時水浴槽水面高度盡量與血清液面等高;滅活后使用冷水浴取代冰箱降溫,能最大程度減少對血清的破壞。直接選擇購買已滅活的血清產(chǎn)品,也是個好選擇噢!

 

 

 

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